普遍的なTaqManマルチプレックスQPCRマスターの組合せの生化学的な試薬

普遍的なTaqManマルチプレックスqPCRのマスターの組合せ

プライマー設計原理:

1. 拡大プロダクトの長さは80-300 bpの間にあるために推薦される;

2. プライマー長さ:18-25 bp;

3. プライマーの基盤G+Cの内容は40%-60%の間にあるべきである;

4. 前方プライマーと逆のプライマーのTmの価値違いは2℃よりより少しであり、58-62℃間のTmの価値は最もよい;

5. 基礎配分の偶発性;

6. プライマーは自己補足順序を含むべきではない他では二次ヘアピン構造を形作る;

7. そこに補足以上4または2つのプライマー間の一致する基盤あるべきではない、他ではプライマー二量体は、3時の特に補足の重複端形作られる;

8. 3つはGまたはCであるためにプライマーの末端の基盤提案される;

9. 他の無指定プロダクトはNCBIの比較の結果で見つけられなかった。

普遍的なTaqManマルチプレックスqPCRのマスターの組合せの導入:

このプロダクトはGSKの緑Iの想像上の蛍光性方法を使用してqPCRのための2x予混合の解決である。中心の部品、TaqのDNAポリメラーゼは、低温の条件の下で効果的に無指定の拡大を禁じることができる抗体方法によって妨げられる熱活動化させたDNAポリメラーゼである。その間、反作用の緩衝と結合されてqPCRのために最大限に活用した、TaqのDNAポリメラーゼは高い特定性および感受性のqPCRの反作用のために非常に適している。よい標準的なカーブはターゲット遺伝子の定量分析のために正確、再生可能信頼できる広く量的な区域で得ることができる。同時に、このプロダクトはすべてのqPCRの器械の使用のために適している、異なった器械のROXの集中を調節する必要性がない特別なROXの受動の参照の染料を含み。青い染料はサンプルを加えるトレーサーの効果をもたらす、黄色い型板の希釈剤は同時に提供される予混合で加えられ。型板が黄色い型板の希釈剤と薄くなり、青い反作用の予混合、青からの反作用システム プロセスの準備のトレーサーの役割を担い、漏出かmisadditionを防ぐことができる緑への色の変更に加えた時。青および黄色の染料のスペクトルはqPCRの染料と重複しないし、反作用の結果に影響を与えない。

普遍的なTaqManマルチプレックスqPCRのマスターの組合せについての試金の議定書/プロシージャ:

1. （任意）型板の希薄:

このキットは40x黄色い型板の希薄の緩衝を、40折目薄くした正確に型板はqPCRの反作用の液体に液体ことをの色の変更によって加えられたかどうか定めるのに使用することができる黄色い型板の希薄を提供する。希薄の型板量に従って20ul qPCRの反作用システムを、一例として取ることは20ul qPCRの反作用の解決に、元の型板の対応する希薄方法次のテーブル加えた（一例として薄くなる100ulに元の型板を持って行く）参照することができる:

例:

2ulは20ul qPCRの反作用システムに型板を加えられるべきである薄くした。

元の型板の容積が20ul時100ul型板の希薄システムを一例として取って、25ul 40xの黄色い型板の希薄の緩衝は加えられ、それからヌクレアーゼなしの水55ulは100ulの総容積に加えられる。

今では40x黄色い型板の希薄の緩衝は10xである。20ul希薄の希薄の緩衝に薄くされた型板の2ulを加えれば、最終的な40×黄色の型板の希薄の緩衝は1xである。結論として、黄色い型板の希薄の緩衝は最終的なqPCRシステムの1xべきである。

普遍的なTaqManマルチプレックスqPCRのマスターの組合せの製品に関する情報:

普遍的なTaqManマルチプレックスqPCRのマスターの組合せとの貯蔵および処理条件:

ぬれたアイス パックの交通機関;12か月間有効な-20℃の温度で貯えられる。

注:型板が薄くなる必要はないかまたはG3362-2の型板の希釈剤が使用されなければ、このステップを無視できる。

2. PCRの反作用のプロシージャ（器械に従って調節することができる）:

a:拡大の特定性が改善される必要があればツー ステップ プロシージャまたは焼きなましの温度は使用することができる;拡大の効率を改善するためには、スリー ステップ プロシージャか延長ひとときは使用することができる。

注:

1. RNaseの汚染を避けるために操作の間に使い捨て可能な手袋を身に着けなさい。

2. 逆のトランスクリプション プロダクトは-20℃で少しの間貯えることができる。長期保管が必要なら、繰り返されたfreeze-thaw周期を避けるパッキングの後で-80℃でそれらを貯えることを推薦する。

3. 型板がeukaryotic起源なら、Oligo （dT） 18プライマーを選ぶことを推薦し、3'とそれを多実物大のcDNAの最も高い収穫を得るeukaryotic mRNAの尾組み合わせる。

4. prokaryotic RNAの逆のトランスクリプションのために、Hexamerの任意プライマーか遺伝子の特定のプライマーは使用されるべきである。

5. Hexamerの任意プライマーに広い適用の可能性があり、mRNA、rRNA、tRNA、小さいRNAおよびlncRNAの型板のために適している。

6. 逆のトランスクリプションがqPCRの試金に先行していればmRNAのすべての地域のcDNAの統合の効率に量的な結果の信用そして反復性の改善を助ける同じをするために、Oligo （dT） 18プライマーおよびHexamerの任意プライマーは混合することができる。

7. それに続くqPCRのプライマーがエクソンを渡って設計されていれば、ゲノムの取り外しのステップは省略することができる。

共通の問題および解決:

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